一种地衣芽孢杆菌发酵烟叶增香提质的方法与流程

：本发明属于农业微生物技术和卷烟生产领域，具体地，本发明涉及一种地衣芽孢杆菌发酵提升上部烟叶品质的方法。

背景技术

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背景技术：

1、烟叶醇化是提升烟叶品质的一个关键环节，目前烟草工业企业主要采用的还是自然醇化。自然醇化是片烟在贮存条件良好的仓库内贮存一定时间，借助其内部缓慢的化学反应及微生物和酶介入的生化反应，达到提高烟叶品质的目的。烟叶在醇化期的质量变化趋势为先升高后下降。卷烟生产过程中，烟叶使用周期很难与烟叶质量变化周期相匹配，即大量烟叶不能在其达到质量最佳醇化期的时间内被完全使用，这就需要对烟叶进行保质工作，减轻其质量下降的程度。

2、近年来，利用密封充氮的方式对烟叶进行保质成为烟叶原料研究的热点，其机理是通过降低烟叶密封垛内的氧气含量，进而降低烟叶表面微生物和酶的活性以及烟叶内需氧反应的速率，以达到烟叶保质的目的?；档骺夭挚獾耐乒阌τ?，就创造了烟叶贮存中大面积且持续时间久的低氧环境。

3、烟叶经自然醇化，各种化学成分区域协调，烟叶品质得到提升。但有些等级烟叶存在固有的问题，很难通过自然醇化的过程得到明显改善。烟叶中蛋白质含量偏高会使烟叶的刺激性增加，劲头过大，碱性气息等杂气较重。如何利用好烟叶保质期内的特定环境，提高烟叶在机械调控库中醇化的质量迫在眉睫，这些矛盾的日益显现使得微生物及发酵技术应用到了卷烟工业中。

技术实现思路

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技术实现要素：

1、为了解决上述技术问题，本发明将通过生物技术手段将一株地衣芽孢杆菌接种到烟叶表面进行发酵。通过微生物发酵，最大限度的降低烟叶负面品质，提高烟叶质量，为提高卷烟品质提供一条新的思路。

2、本发明提供的技术方案之一，是一种改善烟叶品质的方法，所述方法是通过地衣芽孢杆菌对烟叶进行微氧发酵醇化，利用所述地衣芽孢杆菌具有兼性厌氧和能在低氧环境下产出碱性蛋白酶的性状，使得发酵后烟叶香气成分增加，烟叶的香气质提升，刺激下降，杂气减轻，整体烟叶品质得到提升。具体地，所述方法包括如下步骤：

3、将地衣芽孢杆菌菌悬液按菌悬液体积：烟叶质量＝0.5-2:10喷洒在烟叶上，温度为25-30℃，湿度为55-70％，氧气含量小于2％条件下，发酵24-48h后，烘干至含水量11-13％备用；

4、进一步地，所述烟叶为上部烟叶，更进一步地，所述烟叶为仓库醇化片烟；

5、进一步地，所述地衣芽孢杆菌，菌株编号：cicc?20004；

6、进一步地，上述发酵过程在烟叶机械调控仓库，或者模拟烟叶机械调控库的保温箱中进行；

7、进一步地，所述模拟烟叶机械调控仓库可通过外置制氮机和空气循环泵往用塑料帷幕密封的烟垛内通入氮气，将氧气浓度浓度控制在2％以内；

8、进一步地，所述地衣芽孢杆菌菌悬液的制备方法如下：

9、(1)菌种培养：将活化后的菌种取一环接种至lb培养基中，25-30℃，100-150r/min培养24-48h，所述lb培养基中添加0-20％(v/v)的烟草浸提液；

10、优选地，所述lb培养基中添加15-20％(v/v)的烟草浸提液；

11、进一步地，所述烟草浸提液的制备方法如下：取烟叶作为原料，将原料与80℃的热水按照质量体积比1:10-1:12比例混合，恒温加热1-2h，之后将混合物抽滤得到烟草浸提液；

12、进一步地，所述lb培养基组成为：蛋白胨5g/l，牛肉浸取物3g/l，氯化钠5g/l，其余为水，naoh调节培养基ph?7.0；

13、进一步地，培养过程中通入氮气，将内部空气氧气控制在2％以下；

14、(2)将步骤(1)的发酵产物离心收集湿菌体，用无菌去离子水对湿菌体进行重悬即得地衣芽孢杆菌菌悬液，使菌体浓度稳定在108-109cfu/ml，测得此时od600＝0.40-0.50。

15、进一步地，所述离心条件为：4℃，10000r/min，10min。

16、本发明提供的技术方案之二，是由技术方案一所述方法制备的烟叶。

17、本发明提供的技术方案之三，是上述制备获得的烟叶的应用，特别是在卷烟领域中的应用。

18、有益效果：

19、本发明将定向筛选出的一株地衣芽孢杆菌接种至烟叶表面，在低氧气浓度条件下发酵烟叶，可以提升烟叶的品质。其机理为在微氧或无氧环境下，筛选的地衣芽孢杆菌容易成为优势菌株，其在烟叶表面进行生长繁殖，利用烟草中的碳水化合物等大分子物质，对烟叶内的大分子物质进行降解，分泌碱性蛋白酶对烟草内的蛋白质进行分解，降低烟叶刺激性，杂气从而提高卷烟的品质。本发明利用一株地衣芽孢杆菌接种在烟叶表面进行发酵，容易实施，成本低廉，基于卷烟实际生产并应用于工业化生产。

技术特征：

1.一种改善烟叶品质的方法，其特征在于，所述方法是通过地衣芽孢杆菌对烟叶进行微氧发酵醇化，使整体烟叶品质得到提升。

2.如权利要求1所述的一种改善烟叶品质的方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌，菌株编号：cicc?20004。

3.如权利要求1所述的一种改善烟叶品质的方法，其特征在于，所述烟叶为上部烟叶。

4.如权利要求1所述的一种改善烟叶品质的方法，其特征在于，将地衣芽孢杆菌菌悬液按菌悬液体积：烟叶质量＝0.5-2:10喷洒在烟叶上，温度为25-30℃，湿度为55-70％，氧气含量小于2％条件下，发酵24-48h后，烘干至含水量11-13％。

5.如权利要求4所述的一种改善烟叶品质的方法，其特征在于，所述发酵的过程在烟叶机械调控仓库，或者模拟烟叶机械调控库的保温箱中进行。

6.如权利要求4所述的一种改善烟叶品质的方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌菌悬液的制备方法如下：

7.如权利要求6所述的一种改善烟叶品质的方法，其特征在于，所述烟草浸提液的制备方法如下：取烟叶作为原料，将原料与80℃的热水按照质量体积比1:10-1:12比例混合，恒温加热1-2h，之后将混合物抽滤得到烟草浸提液。

8.如权利要求6所述的一种改善烟叶品质的方法，其特征在于，所述lb培养基中添加15-20％的烟草浸提液。

9.由权利要求1-8任意一项所述方法制备的烟叶。

10.权利要求9所述烟叶在卷烟领域中的应用。

技术总结
本发明属于农业微生物技术和卷烟生产领域，具体地，本发明涉及一种地衣芽孢杆菌发酵提升上部烟叶品质的方法。所述方法是通过地衣芽孢杆菌对烟叶进行微氧发酵醇化，利用所述地衣芽孢杆菌具有兼性厌氧和能在低氧环境下产出碱性蛋白酶的性状，使得发酵后烟叶香气成分增加，烟叶的香气质提升，刺激下降，杂气减轻，整体烟叶品质得到提升。本发明利用一株地衣芽孢杆菌接种在烟叶表面进行发酵，容易实施，成本低廉，基于卷烟实际生产并应用于工业化生产。

技术研发人员：刘远上,张碰元,李敏,谭宏祥,刘波,康迪,何峰,崔扶云,毛宁阳
受?；さ募际跏褂谜撸?/b>河北中烟工业有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15