石南藤中总木脂素的富集和纯化方法及其应用

本发明涉及一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法及其应用，属于生物活性物质提取领域。

背景技术：

1、石南藤piper.wallichii(miq.)hand.-mazz为胡椒属植物，地上部份为药用部位，作为民族药石南藤药材基原植物之一，收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2019版)，具有袪风通络，补肾壮阳，止咳平喘，活血止痛的功效；用于风寒湿痹，腰膝酸痛，阳痿，咳嗽气喘，痛经，跌扑肿痛。有木脂素其主要化学成分和活性成分，具有抗血小板凝聚生物活性。

2、国内外对中药组分的富集与纯化方法，一般先采用溶剂萃取，其次用大孔树脂、硅胶、ods、葡聚糖凝胶等层析柱一次或多次分离纯化，然后采用活性炭进行脱色处理，最后得到含量较高某类组分。现有技术提取纯化手段步骤复杂、纯度不高，并且色素较浓。

3、神经炎症反应是多种神经系统疾病的主要原因，例如阿尔兹海默症、缺血性中风等。lps是革兰氏阴性菌细胞壁的一个毒性成分，可以激活许多炎性反应发生，并引发各类炎症因子的合成和释放，从而导致机体产生炎性反应。建立以lps诱导pc12细胞神经元炎性损伤模型，筛选石南藤总木脂素抗炎活性。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是：提供一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法，解决现有技术中石南藤中总木脂素的富集和纯化存在的问题。

2、本发明的技术方案是：一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法，药材粉碎成中粉，加80％乙醇使润湿，浸渍8-12h，用14-20倍量80％乙醇以6-12ml/(min.kg)的速率进行渗漉，得到石南藤提取物，再加入guio@au，充分研磨，后经正己烷洗脱，减压干燥洗脱液收集总木脂素。

3、所述的一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法，药材粉碎成中粉，加80％乙醇使润湿，浸渍10h，用20倍量80％乙醇以9ml/(min·kg)的速率进行渗漉，得到石南藤提取物，再加入guio@au，充分研磨，后经正己烷洗脱，减压干燥洗脱液收集总木脂素。

4、所述的guio@au的制备方法：将四氯化锆和2-氨基对苯二甲酸溶解于dmf溶液中，然后加入去离子水和乙酸，将最终溶液转移到高压釜中，在120℃下反应12小时，冷却至室温后，回收产物，离心，用dmf和去离子水洗涤数次，将产物保存在水中以备进一步使用；将k2co3溶解在去离子水中，然后在高速搅拌下加入haucl4溶液；将合成的产物溶液加入老化溶液中，然后加入pvp水溶液和甲醛；将混合物溶液在室温下以低速搅拌；最后，通过离心收集深蓝色溶液，即为新型吸附功能材料uio@au，图1。

5、还包括，所述的guio@au分两次加入：石南藤提取物加入guio@au，充分研磨，后再加入guio@au，将混合样品装柱后经正己烷洗脱。

6、所述的石南藤提取物与guio@au的质量比为1:4。

7、所述的总木脂素在制备抑制脂多糖诱导pc细胞神经炎症药物中的应用。

8、将石南藤中药材磨成粉后，置于不同条件传统渗漉结合新材富集和纯化方法得到总木脂素含量达65％以上，获得该药物木脂素纯度、脱色素效率高等。从石南藤提取分离得到的总木脂素类成分，作用于由lps诱导pc12神经细胞抗炎活性成分。研究发现，通过测定其炎症模型的pc12细胞的存活率及显微观察细胞形态，该总木脂素成分显著提高其诱导后的pc12细胞活力，并改善细胞形态，具有抑制其炎症反应。

9、本发明的有益效果：本研究采用传统渗漉结合新材富集和纯化方法得到总木脂素含量达65％以上。与大孔树脂、硅胶和氧化铝富集纯化相比较，本方法获得的石南藤总木脂素纯度较高，脱色素效果较好，省略了脱色素的步骤?；狗⑾质咸僮苣局啬芤种朴芍嗵怯盏紁c12神经细胞炎症。传统渗漉结合新材富集和纯化方法处理在一定程度上提高了石南藤总木脂素的得率和抑制神经炎症活性，为民族药石南藤的开发与资源利用提供了理论依据。

10、本发明制备的总木脂素作用于lps诱导pc12细胞炎症模型，可以提高pc12细胞的存活率及改善细胞形态，表明总木脂素对lps诱导pc12细胞有?；ぷ饔?。

技术特征：

1.一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法，其特征在于：药材粉碎成中粉，加80％乙醇使润湿，浸渍8-12h，用14-20倍量80％乙醇以6-12ml/(min.kg)的速率进行渗漉，得到石南藤提取物，再加入guio@au，充分研磨，后经正己烷洗脱，减压干燥洗脱液收集总木脂素。

2.根据权利要求1所述的一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法，其特征在于：药材粉碎成中粉，加80％乙醇使润湿，浸渍10h，用20倍量80％乙醇以9ml/(min·kg)的速率进行渗漉，得到石南藤提取物，再加入guio@au，充分研磨，后经正己烷洗脱，减压干燥洗脱液收集总木脂素。

3.根据权利要求1所述的一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法，其特征在于：所述的guio@au的制备方法：将四氯化锆和2-氨基对苯二甲酸溶解于dmf溶液中，然后加入去离子水和乙酸，将最终溶液转移到高压釜中，在110-130℃下反应10-14小时，冷却至室温后，回收产物，离心，用dmf和去离子水洗涤数次，将产物保存在水中以备进一步使用；将k2co3溶解在去离子水中，然后在高速搅拌下加入haucl4溶液；将合成的产物溶液加入老化溶液中，然后加入pvp水溶液和甲醛；将混合物溶液在室温下以低速搅拌；

4.根据权利要求1或2所述的一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法，其特征在于：还包括，所述的guio@au分两次加入：石南藤提取物加入guio@au，充分研磨，后再加入guio@au，将混合样品装柱后经正己烷洗脱。

5.根据权利要求1或2所述的一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法，其特征在于：所述的石南藤提取物与guio@au的质量比为1:4。

6.如权利要求1或2所述的总木脂素在制备抑制脂多糖(lps)诱导pc12细胞神经炎症药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种石南藤中总木脂素的富集和纯化方法，其特征在于：药材粉碎成中粉，加80％乙醇使润湿，浸渍8?12h，用14?20倍量80％乙醇以6?12mL/(min.kg)的速率进行渗漉，得到石南藤提取物，再加入gUiO@Au，充分研磨，后经正己烷洗脱，减压干燥洗脱液，收集总木脂素。本发明制备的总木脂素能提高LPS诱导PC12细胞的存活率，并改善细胞形态。

技术研发人员：周婵媛,范东生,李玲,李晓倩,黄健
受?；さ募际跏褂谜撸?/b>贵阳学院
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10