APOE和APOB修饰的脂质纳米颗粒组合物及其用途的制作方法

背景技术：

1、可离子化脂质纳米颗粒(lnp)已广泛用于基因治疗剂(例如，rna治疗剂)的全身递送。先前已经报道了用于lnp配制物的各种类型的可离子化脂质材料，诸如c12-200、ckk-e12和dlin-mc3-dma，并且已经证明了在0.002mg?sirna/kg的剂量水平下在肝中的有效基因沉默(dong等人，proc.natl.acad.sci.u.s.a.111,3955–3960(2014))。尽管已经显示包含某些配体增强mrna?lnp的递送和治疗效率，但是已经认识到，附接部分以增强递送和治疗效率可能增加制造lnp系统的过程的复杂性、成本和调节难度(cheng等人，science.2012年11月16日；338(6109):903-10)。另外，已经证明，当脂质纳米颗粒暴露于生物流体时(其中发生与介质中的蛋白质相互作用并因此形成蛋白质冠)，一些配体的特异性可能消失(salvati等人，nat?nanotechnol.2013年2月；8(2):137-43)。因此，在可能的临床益处与靶向rna-lnp制造的复杂性和成本之间存在权衡。

2、已经检查了细胞摄取的机制，并且已经显示了血清apoe(载脂蛋白e)在lnp表面上的吸附是促进将lnp通过低密度脂蛋白(ldl)受体细胞内递送进入肝细胞的主要效应物(akinc等人，mol.ther.18,1357–1364(2010))。然而，尽管已经显示lnp对于体内递送是有利的，但是将基因治疗剂系统递送至肝细胞和其它细胞类型仍然是具有高度挑战性的。

3、关于基因治疗剂向肝细胞的递送，这些lnp的相对大的尺寸通过几种机制降低了肝脏适应症的治疗指数：(1)较大的lnp不能有效地绕过衬在肝窦状隙中的内皮细胞的窗孔，从而阻止进入靶细胞(肝细胞)；(2)较大的lnp不能经由网格蛋白介导的与几种不同受体(例如，脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)、低密度脂蛋白(ldl)受体)的胞吞作用被肝细胞有效地内化；以及(3)高于某一阈值大小的lnp倾向于被网状内皮系统系统的细胞优先摄取，这可以激发剂量限制性免疫应答。此外，lnp介导的较大刚性多核苷酸货物(例如，双链线性dna、质粒dna、末端封闭的的双链dna(cedna)的递送相对于较小和/或柔性货物(例如，sirna)存在另外的挑战。此类挑战涉及当包封大的刚性货物时所得lnp的尺寸。

4、关于将基因治疗剂递送至其他类型的细胞(例如，视网膜细胞)，将这些治疗递送至视网膜色素上皮(rpe)细胞和/或感光细胞的最佳方法仍有待改进，以增加转导功效并减少与视网膜下注射病毒载体悬浮液所需的高侵入性手术相关的并发症。迄今为止，当lnp被用于视网膜基因转导时，已经在眼杯(eyecup)中的视网膜色素上皮(rpe)中观察到大部分表达(patel等人，journal?of?controlled?release,303卷，2019年6月10日，第91-100页)，并且将基因治疗递送到视网膜中的实际光感受器中仍然具有重大挑战。

5、因此，为了充分实现对肝细胞以及其它细胞类型(诸如视网膜细胞)的核酸治疗的可能，需要有效的核酸体内递送系统。

技术实现思路

1、本公开首次描述了用于视网膜递送的脂质纳米颗粒(例如，具有如本文所述的脂质a作为可离子化或阳离子脂质的脂质纳米颗粒)与基因治疗货物(诸如，mrna或末端封闭的dna)的组合。使用小鼠、大鼠和非人灵长类动物(nhp)体内系统，本公开证明了使用lnp递送的mrna货物，可在眼杯(rpe)和神经视网膜中实现稳健的转基因表达，其中光感受器位于神经视网膜中。重要的是，本文提供的数据显示在低剂量lnp递送的mrna下实现饱和，从而成功地实现优异的治疗指数和潜在治疗的耐受性。以前，当lnp被用于视网膜基因转导时，已经在眼杯中的视网膜色素上皮(rpe)中观察到大部分表达(patel等人，journal?ofcontrolled?release,303卷，2019年6月10日，第91-100页)，而将基因治疗递送到视网膜中的实际光感受器中仍然具有重大挑战。在本公开中呈现的结果令人惊讶地证明不仅lnp能够以与rpe的表达相等的表达进入眼杯，而且在低剂量下也是如此。

2、在一个方面，本公开提供了药物组合物，该药物组合物包含脂质纳米颗粒(lnp)和治疗性核酸(tna)，其中lnp包含与lnp连接的载脂蛋白e(apoe)多肽或其片段和/或载脂蛋白b(apob)多肽或其片段，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。根据一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段能够结合低密度脂蛋白(ldl)受体或ldl受体家族成员。根据进一步的实施方案，lnp包含apoe多肽或其片段。根据本文的任何实施方案中的一些实施方案，lnp包含apob多肽或其片段。根据本文的任何实施方案中的一些实施方案，apoe多肽包含eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc(seq?id?no:1)的氨基酸序列或与seq?idno:1中所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seqid?no:1中所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq?id?no:1中所示的氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽由seq?id?no:1组成。根据本文的任何实施方案中的一些实施方案，apoe多肽与seq?id?no:3中所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq?id?no:3中所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq?id?no:3中所示的氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq?id?no:3中所示的氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq?idno:3中所示的氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seqid?no:3中所示的氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽包含seq?id?no:3。根据一些实施方案，apoe多肽由seq?id?no:3组成。根据本文任何实施方案中的一些实施方案，与lnp连接的apoe多肽是seq?id?no:1中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc的片段，其中该片段能够结合到ldl受体。根据本文任何实施方案中的一些实施方案，与lnp连接的apoe多肽是seq?id?no:3中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc的片段，其中该片段能够结合到ldl受体。根据一些实施方案，lnp被内化到细胞中。根据本文的任何实施方案中的一些实施方案，apob多肽包含ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc(seq?id?no:2)的氨基酸序列或与seq?idno:2具有至少80％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?id?no:2中所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?id?no:2中所示的氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?id?no:2中所示的氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?id?no:2中所示的氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?id?no:2中所示的氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽具有由seq?id?no:2组成的氨基酸序列。根据一些实施方案，apob多肽由ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc(seq?id?no:4)组成。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apob多肽包含ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc(seq?id?no:4)的氨基酸序列或与seq?id?no:4中所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?id?no:4中所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?idno:4中所示的氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seqid?no:4中所示的氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?id?no:4中所示的氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?id?no:4中所示的氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽由ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc(seq?id?no:4)组成。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，与lnp连接的apob多肽是seq?id?no:2中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc的片段，其中该片段能够结合到ldl受体。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，与lnp连接的apob多肽是seq?id?no:4中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkgg的片段，其中该片段能够结合到ldl受体。根据一些实施方案，lnp被内化到细胞中。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含选自由以下组成的组的脂质：阳离子脂质、甾醇或其衍生物、非阳离子脂质和至少一种peg化脂质。

3、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，tna被包封在lnp中。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，该tna选自由以下组成的组：小基因、质粒、小环、小干扰rna(sirna)、微rna(mirna)、反义寡核苷酸(aso)、核酶、末端封闭的(cedna)、迷你串(ministring)、doggybonetm、末端经前端粒封闭的dna或哑铃线性dna、切丁酶-底物dsrna、小发夹rna(shrna)、非对称干扰rna(airna)、微rna(mirna)、mrna、trna、rrna、grna、dna病毒载体、病毒rna载体、非病毒载体及其任何组合。根据一些实施方案，该tna为cedna。根据一些实施方案，该cedna为线性双链体dna。根据一些实施方案，该tna为mrna。根据一些实施方案，该tna为sirna。根据一些实施方案，该tna为质粒。

4、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含peg化脂质，其中peg化脂质与apoe多肽或其片段连接，或者peg化脂质与apob多肽或其片段连接。根据一些实施方案，apoe多肽或其片段或apob多肽或其片段与peg化脂质化学缀合。

5、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，将药物组合物施用于受试者。根据一些实施方案，受试者是需要用包封有tna的lnp治疗的人类患者。

6、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，经由存在于lnp中的apoe多肽和/或apob多肽与ldlr受体的结合，将组合物递送至表达ldlr的组织。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，将组合物递送至眼中的视网膜细胞。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，将组合物递送至光感受器(pr)细胞。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，将组合物递送至视网膜色素上皮(rpe)细胞。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，将所述组合物递送至光感受器(pr)细胞和视网膜色素上皮(rpe)细胞，其中tna在pr细胞中的表达和tna在rpe细胞中的表达均匀分布。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，将组合物递送至肝中的肝细胞。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，将该组合物内化在光感受器(pr)细胞中。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，将该组合物内化在视网膜色素上皮(rpe)细胞中。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，将该组合物内化在肝细胞中。

7、根据一些实施方案，阳离子脂质由式(i)表示：

8、

9、或其药学上可接受的盐，其中：

10、r1和r1'各自独立地为任选取代的直链或支链c1-3亚烷基；

11、r2和r2'各自独立地为任选取代的直链或支链c1-6亚烷基；

12、r3和r3'各自独立地为任选取代的直链或支链c1-6烷基；

13、或可替代地，当r2是任选取代的支链c1-6亚烷基时，r2和r3与它们的居间n原子一起形成4元至8元杂环基；

14、或可替代地，当r2'是任选取代的支链c1-6亚烷基时，r2'和r3'与它们的居间n原子一起形成4元至8元杂环基；

15、r4和r4’各自独立地为-cra、-c(ra)2cra或-[c(ra)2]2cra；

16、ra每次出现时独立地为h或c1-3烷基；

17、或可替代地，当r4为-c(ra)2cra或-[c(ra)2]2cra并且当ra是c1-3烷基时，r3和r4与它们的居间n原子形成4元至8元杂环基；

18、或可替代地，当r4'为-c(ra)2cra或-c(ra)2]2cra并且当ra是c1-3烷基时，r3'和r4'与它们的居间n原子一起形成4元至8元杂环基；

19、r5和r5'各自独立地为氢气、c1-20亚烷基或c2-20亚烯基；

20、r6和r6'每次出现时独立地为c1-20亚烷基、c3-20亚环烷基或c2-20亚烯基；并且

21、m和n各自独立地是选自1、2、3、4和5的整数。

22、根据一些实施方案，阳离子脂质由式(ii)表示：

23、

24、或其药学上可接受的盐，其中：

25、a为1-20的整数；

26、b为2-10的整数；

27、r1不存在或选自(c2-c20)烯基、-c(o)o(c2-c20)烷基和被(c2-c20)烷基取代的环丙基；并且

28、r2为(c2-c20)烷基。

29、根据一些实施方案，阳离子脂质为1-(4-(2-(2-(1-(2-((2-(4-(2-(2-(4-(油酰氧基)苯基)乙酰氧基)乙基)哌啶-1-基)乙基)二硫烷基)乙基)哌啶-4-基)乙氧基)-2-氧代乙基)苯基)9-(十三烷-5-基)壬二酸酯(脂质58)，由以下结构式表示：

30、

31、根据一些实施方案，脂质由式(v)表示：

32、

33、或其药学上可接受的盐，其中：

34、r1和r1'各自独立地为任选被一个或多个选自ra的组取代的(c1-c6)亚烷基；

35、r2和r2'各自独立地为(c1-c2)亚烷基；

36、r3和r3’各自独立地为任选被一个或多个选自rb的组取代的(c1-c6)烷基；

37、或可替代地，r2和r3和/或r2'和r3'与它们的居间n原子一起形成4元至7元杂环基；

38、r4和r4'各自为被-c(o)o-中断的(c2-c6)亚烷基；

39、r5和r5'各自独立地为(c2-c30)烷基或(c2-c30)烯基，它们各自任选地被-c(o)o-或(c3-c6)环烷基中断；并且

40、ra和rb各自为卤素或氰基。

41、根据一些实施方案，阳离子脂质由式(xv)表示：

42、

43、或其药学上可接受的盐，其中：

44、r'不存在，为氢或c1-c6烷基；前提条件是当r'为氢或c1-c6烷基时，r'、r1和r2所附接到的氮原子均被质子化；

45、r1和r2各自独立地为氢、c1-c6烷基或c2-c6烯基；

46、r3为c1-c12亚烷基或c2-c12亚烯基；

47、r4为c1-c16非支链烷基、c2-c16非支链烯基，或其中：

48、r4a和r4b各自独立地为c1-c16非支链烷基或c2-c16非支链烯基；

49、r5不存在，为c1-c8亚烷基或c2-c8亚烯基；

50、r6a和r6b各自独立地为c7-c16烷基或c7-c16烯基；前提条件是r6a和r6b组合中的碳原子总数大于15；

51、x1和x2各自独立地为-oc(＝o)-、-sc(＝o)-、-oc(＝s)-、-c(＝o)o-、-c(＝o)s-、-s-s-、-c(ra)＝n-、-n＝c(ra)-、-c(ra)＝no-、-o-n＝c(ra)-、-c(＝o)nra-、-nrac(＝o)-、-nrac(＝o)nra-、-oc(＝o)o-、-osi(ra)2o-、-c(＝o)(cra2)c(＝o)o-或oc(＝o)(cra2)c(＝o)-；其中：

52、ra每次出现时独立地为氢或c1-6烷基；并且

53、n是选自1、2、3、4、5和6的整数。

54、根据一些实施方案，阳离子脂质由式(xx)表示：

55、

56、或其药学上可接受的盐，其中：

57、r'不存在，为氢或c1-c3烷基；前提条件是当r'为氢或c1-c3烷基时，r'、r1和r2所附接到的氮原子均被质子化；

58、rr1和r2各自独立地为氢或c1-c3烷基；

59、r3为c3-c10亚烷基或c3-c10亚烯基；

60、r4为c1-c16非支链烷基、c2-c16非支链烯基，或其中：

61、r4a和r4b各自独立地为c1-c16非支链烷基或c2-c16非支链烯基；

62、r5不存在，为c1-c6亚烷基或c2-c6亚烯基；

63、r6a和r6b各自独立地为c7-c14烷基或c7-c14烯基；

64、x为-oc(＝o)-、-sc(＝o)-、-oc(＝s)-、-c(＝o)o-、-c(＝o)s-、-s-s-、-c(ra)＝n-、-n＝c(ra)-、-c(ra)＝no-、-o-n＝c(ra)-、-c(＝o)nra-、-nrac(＝o)-、-nrac(＝o)nra-、-oc(＝o)o-、-osi(ra)2o-、-c(＝o)(cra2)c(＝o)o-或oc(＝o)(cra2)c(＝o)-；其中：

65、ra每次出现时独立地为氢或c1-6烷基；并且

66、n是选自1、2、3、4、5和6的整数。

67、根据一些实施方案，阳离子脂质选自表2、表5、表6、表7或表8中的任何脂质。

68、根据一些实施方案，阳离子脂质是由以下结构表示的脂质a：

69、

70、或其药学上可接受的盐。

71、根据一些实施方案，阳离子脂质为具有以下结构的mc3(6z,9z,28z,31z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基-4-(二甲基氨基)丁酸酯(dlin-mc3-dma或mc3)：

72、

73、或其药学上可接受的盐。

74、根据一些实施方案，甾醇或其衍生物为胆固醇。

75、根据一些实施方案，甾醇或其衍生物为β-谷甾醇。

76、根据一些实施方案，非阳离子脂质选自由以下组成的组：二硬脂?；?sn-甘油-磷酸乙醇胺(dspe)、二硬脂?；字５?dspc)、二油?；字５?dopc)、二棕榈?；字５?dppc)、二油?；字８视?dopg)、二棕榈?；字８视?dppg)、二油?；字Ｒ掖及?dope)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(popc)、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺(pope)、二油?；字Ｒ掖及?-(n-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-甲酸酯(dope-mal)、二棕榈?；字Ｒ掖及?dppe)、二肉豆?；字Ｒ掖及?dmpe)、二硬脂?；字；?乙醇胺(dspe)、单甲基磷脂酰乙醇胺(诸如16-o-单甲基pe)、二甲基磷脂酰乙醇胺(诸如16-o-二甲基pe)、18-1-反式pe、1-硬脂?；?2-油?；字Ｒ掖及?sope)、氢化大豆磷脂酰胆碱(hspc)、卵磷脂酰胆碱(epc)、二油?；字Ｋ堪彼?dops)、鞘磷脂(sm)、二肉豆?；字５?dmpc)、二肉豆?；字８视?dmpg)、二硬脂?；字８视?dspg)、二芥?；字５?depc)、棕榈?；王Ａ字８视?popg)、二反式油?；字Ｒ掖及?depe)、1,2-二月桂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dlpe)；1,2-二植烷?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dphype)；卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、卵鞘磷脂(esm)、脑磷脂、心磷脂、磷脂酸、脑苷、磷酸二鲸蜡酯、溶血磷脂酰胆碱、二亚油?；字５钜约八堑幕旌衔?。根据一些实施方案，非阳离子脂质选自由以下组成的组：二油酰磷脂酰胆碱(dopc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)和二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)。

77、根据一些实施方案，peg化脂质选自由以下组成的组：peg-二月桂基氧基丙基；peg-二肉豆蔻基氧基丙基；peg-二棕榈基氧基丙基、peg-二硬脂基氧基丙基；l-(单甲氧基-聚乙二醇)-2,3-二肉豆蔻酰甘油(dmg-peg)；1,2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[叠氮基(聚乙二醇)]和二硬脂?；?rac-甘油-聚(乙二醇)(dsg-peg)；peg-二月桂基甘油；peg-二棕榈酰甘油；peg-二硬脂酰甘油；peg-二月桂酰糖酰胺；peg-二肉豆蔻酰糖酰胺；peg-二棕榈酰糖酰胺；peg-二硬脂酰糖酰胺；(l-[8'-(胆甾-5-烯-3[β]-氧基)甲酰胺基-3',6'-二氧辛?；鵠氨基甲?；?[ω]-甲基-聚(乙二醇)(peg-胆固醇)；3,4-双十四烷氧基苄基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)醚(peg-dmb)，以及l,2-二肉豆蔻?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n[甲氧基(聚乙二醇)(dspe-peg)、l,2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-聚(乙二醇)-羟基(dspe-peg-oh)；以及l,2-二肉豆蔻?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n[甲氧基(聚乙二醇)-叠氮化物(dspe-peg-叠氮化物)。根据一些实施方案，peg化脂质为dmg-peg、dspe-peg、dspe-peg-oh、dspe-peg-叠氮化物、dsg-peg或其组合。根据一些实施方案，至少一种peg化脂质是dmg-peg2000、dspe-peg2000、dspe-peg2000-oh、dspe-peg2000-叠氮化物、dsg-peg2000或其组合。

78、根据本文方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段与lnp的peg化脂质共价连接以形成peg化脂质缀合物。根据一些实施方案，与apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段共价连接的peg化脂质是dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。

79、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段经由不可切割的接头与lnp共价连接。根据一些实施方案，不可切割的接头是含马来酰亚胺的接头。

80、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段经由可切割的接头与lnp共价连接。

81、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段经由含吡啶基二硫化物(pds)的接头与lnp共价连接。

82、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段经由菌株促进的炔-叠氮化物环加成(spaac)化学作用与lnp共价连接。根据一些实施方案，spaac化学作用包括环辛炔或其衍生物与叠氮化合物之间的反应。根据一些实施方案，环辛炔或其衍生物是二苯并环辛炔(dbco)或其衍生物。根据一些实施方案，dbco或其衍生物是dbco官能化的apoe多肽或dbco官能化的apob多肽。根据一些实施方案，dbco官能化的apoe多肽或其中dbco官能化的apob多肽由以下结构表示：

83、

84、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，叠氮化合物是dspe-peg2000-叠氮化物或1,2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[叠氮基(聚乙二醇)-2000]或其盐。

85、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段经由选自氢键、范德瓦尔键、离子键和疏水键的一种或多种非共价相互作用与lnp连接。

86、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，阳离子脂质以约30％至约80％的摩尔百分比存在。

87、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，甾醇以约20％至约50％的摩尔百分比存在。

88、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，非阳离子脂质以约2％至约20％的摩尔百分比存在。

89、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，至少一种peg化脂质以约2.1％至约10％的摩尔百分比存在，或其中至少一种peg化脂质以约1％至约2％的摩尔百分比存在。

90、根据本文的方面和实施方案的一些实施方案，apoe多肽和/或apob多肽以约0.02μg/μg的tna至约0.1μg/μg的tna的总量存在。

91、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，该药物组合物还包括地塞米松棕榈酸酯。

92、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dopc、胆固醇和dmg-peg。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dopc、胆固醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dope、胆固醇和dmg-peg。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dope、胆固醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dspc、胆固醇和dmg-peg。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dspc、胆固醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dopc、β-谷甾醇和dmg-peg。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dopc、β-谷甾醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dope、β-谷甾醇和dmg-peg。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dope、β-谷甾醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dspc、β-谷甾醇和dmg-peg。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含脂质a、dspc、β-谷甾醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。

93、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，dmg-peg为dmg-peg2000。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，dspe-peg为dspe-peg2000或dspe-peg5000。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，e?dspe-peg-叠氮化物为dspe-peg2000-叠氮化物或dspe-peg5000-叠氮化物。根据一些实施方案，lnp包含摩尔比为约51:7.3:38.3:2.9:0.5的脂质a、dopc、甾醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。

94、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含1-(4-(2-(2-(1-(2-((2-(4-(2-(2-(4-(油酰氧基)苯基)乙酰氧基)乙基)哌啶-1-基)乙基)二硫烷基)乙基)哌啶-4-基)乙氧基)-2-氧代乙基)苯基)9-(十三烷-5-基)壬二酸酯(脂质58)，由以下结构式表示：

95、

96、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp的总脂质与tna的比率为约10:1至约40:1。

97、在另一个方面，本公开提供了一种药物组合物，该组合物包含脂质纳米颗粒(lnp)、治疗性信使rna(mrna)和至少一种药学上可接受的赋形剂；其中lnp包含：

98、与lnp连接的apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段；

99、具有以下结构式的阳离子脂质：

100、

101、并且其中lnp能够将mrna递送至视网膜细胞。

102、根据一些实施方案，lnp能够将mrna递送至光感受器(pr)细胞。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp能够将mrna递送至视网膜色素上皮(rpe)细胞。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp能够被内化到pr细胞和/或rpe细胞中。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，mrna表达均匀分布在pr细胞和rpe细胞中。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp能够将mrna递送至视网膜细胞而不导致视网膜降解或外核层(onl)变薄。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段能够结合低密度脂蛋白(ldl)受体或ldl受体家族成员。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含apoe多肽或其片段。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含apob多肽或其片段。根据一些实施方案，apoe多肽包含eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkgg(seq?id?no:3)的氨基酸序列或与seq?id?no:3中所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq?id?no:3中所示的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽由eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkgg(seq?id?no:3)组成。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，与lnp连接的apoe多肽是seq?id?no:3中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc的片段，其中该片段能够结合到ldl受体。根据一些实施方案，apob多肽包含ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc(seq?id?no:4)的氨基酸序列或与seq?id?no:4中所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽与seq?id?no:4中所示的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的序列相似性。根据一些实施方案，apob多肽由ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc(seq?id?no:4)组成。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，与lnp连接的apob多肽是seq?id?no:4中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkgg的片段，其中该片段能够结合到ldl受体。

103、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，mrna被包封在lnp中。

104、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp还包含选自由以下组成的组的脂质：甾醇或其衍生物、非阳离子脂质和至少一种peg化脂质。根据一些实施方案，甾醇或其衍生物为胆固醇。根据一些实施方案，甾醇或其衍生物为β-谷甾醇。

105、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，非阳离子脂质选自由以下组成的组：二油酰磷脂酰胆碱(dopc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)和二油?；?磷脂酰乙醇胺(dope)。

106、根据本文的方面和实施方案的一些实施方案，peg化脂质为dmg-peg、dspe-peg、dspe-peg-oh、dspe-peg-叠氮化物、dsg-peg或其组合。根据一些实施方案，至少一种peg化脂质为dmg-peg2000、dspe-peg2000、dspe-peg2000-oh、dspe-peg-叠氮化物、dsg-peg或其组合。根据一些实施方案，lnp包含脂质a、dopc、胆固醇和dmg-peg；或脂质a、dopc、胆固醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物；或脂质a、dope、胆固醇和dmg-peg；脂质a、dope、胆固醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物；或

107、脂质a、dspc、胆固醇和dmg-peg；或脂质a、dspc、胆固醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物；或脂质a、dopc、β-谷甾醇和dmg-peg；或脂质a、dopc、β-谷甾醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物；或脂质a、dope、β-谷甾醇和dmg-peg；或脂质a、dope、β-谷甾醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物；或

108、脂质a、dspc、β-谷甾醇和dmg-peg；或脂质a、dspc、β-谷甾醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。根据一些实施方案，dmg-peg为dmg-peg2000。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，dspe-peg为dspe-peg2000或dspe-peg5000。根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，dspe-peg-叠氮化物为dspe-peg2000-叠氮化物或dspe-peg5000-叠氮化物。根据一些实施方案，lnp包含摩尔比为约51:7.3:38.3:2.9:0.5的脂质a、dopc、甾醇、dmg-peg和dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。

109、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp包含peg化脂质，其中该peg化脂质与apoe多肽或其片段连接；peg化脂质与apob多肽或其片段连接。根据一些实施方案，apoe多肽或其片段、或apob多肽或其片段与lnp的peg化脂质共价连接以形成peg化脂质缀合物。根据一些实施方案，与apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段共价连接的peg化脂质是dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。

110、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段经由不可切割的接头与lnp共价连接。根据一些实施方案，不可切割的接头是含马来酰亚胺的接头。

111、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段经由可切割的接头共价连接至lnp。

112、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段经由含吡啶基二硫化物(pds)的接头与lnp共价连接。

113、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段经由菌株促进的炔-叠氮化物环加成(spaac)化学与lnp共价连接。

114、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，药物组合物通过视网膜下注射、脉络膜上注射或玻璃体内注射施用于受试者。根据一些实施方案，药物组合物通过视网膜下注射施用于受试者。

115、根据另一个方面，本公开提供由以下结构表示的二苯并环辛炔(dbco)官能化的apoe多肽或apob多肽：

116、

117、其中：

118、apoe多肽包含eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkgg(seq?id?no:3)的氨基酸序列或与seq?id?no:3中所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似；并且

119、apob多肽包含ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc(seq?id?no:4)的氨基酸序列或与seq?id?no:4中所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。

120、根据一些实施方案，使用dbco官能化的apoe多肽或apob多肽作为试剂与叠氮化合物组合来制备药物组合物。

121、根据其它方面，本公开提供使用本文的方面和实施方案的dbco官能化的apoe多肽或apob多肽与叠氮化合物组合制备的脂质纳米颗粒组合物。根据一些实施方案，叠氮化合物是dspe-peg2000-叠氮化物或1,2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[叠氮基(聚乙二醇)-2000]或其盐。

122、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，lnp的直径为约40nm至约120nm。

123、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，纳米颗粒的直径为于约100nm。

124、根据本文的方面和实施方案中的一些实施方案，纳米颗粒的直径为约60nm至约80nm。

125、根据另一方面，本公开提供了一种治疗受试者的基因病症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的本文的方面或实施方案中的任一项的药物组合物或脂质组合物。根据一些实施方案，受试者是人类。根据本文的方法及其实施方案中的一些实施方案，病症是眼部病患。根据本文的方法及其实施方案中的一些实施方案，基因病症选自由以下组成的组：镰状细胞性贫血、黑色素瘤血友病a(凝血因子viii(fviii)缺乏症)和血友病b(凝血因子ix(fix)缺乏症)、囊性纤维化(cftr)、家族性高胆固醇血症(ldl受体缺陷)、肝母细胞瘤、威尔逊病、苯丙酮尿症(pku)、先天性肝卟啉症、遗传性肝代谢疾病、lesch?nyhan综合征、镰状细胞性贫血、地中海贫血、色素性干皮病、范可尼贫血、色素性视网膜炎、共济失调毛细血管扩张症、布鲁姆综合征、视网膜母细胞瘤、粘多糖贮积病(例如，hurler综合征(mps?i型)、scheie综合征(mps?i?s型)、hurler-scheie综合征(mps?i?h-s型)、亨特综合征(mps?ii型)、sanfilippo?a、b、c和d型(mps?iii?a、b、c和d型)、morquio?a和b型(mps?iva和mpsivb)、maroteaux-lamy综合征(mps?vi型)、sly综合征(mps?vii型)、透明质酸酶缺乏症(mpsix型))、niemann-pick病a/b、c1和c2型、法布里病、schindler病、gm2-神经节苷脂沉积症ii型(sandhoff病)、tay-sachs病、异染性脑白质营养不良、krabbe病、粘脂沉积症i、ii/iii和iv型、唾液酸贮积症i和ii型、糖原贮积病i和ii型(庞贝病)、戈谢病i、ii和iii型、胱氨酸病、巴顿病、天冬氨酰氨基葡萄糖尿症、salla病、达农病(lamp-2缺乏症)、溶酶体酸性脂肪酶(lal)缺乏症、神经元蜡样脂褐质沉积症(cln1-8、incl和lincl)、鞘脂症、半乳糖唾液酸中毒、肌萎缩侧索硬化症(als)、帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿病、脊髓小脑共济失调、脊髓性肌萎缩症、弗里德赖希共济失调、杜氏肌营养不良症(dmd)、贝克尔肌营养不良症(bmd)、营养不良性大疱性表皮松解症(deb)、外核苷酸焦磷酸酶1缺乏症、婴儿全身性动脉钙化(gaci)、利伯先天性黑矇(leber?congenital?amaurosis)、stargardt黄斑营养不良(abca4)、鸟氨酸转氨甲酰酶(otc)缺乏症、usher综合征、年龄相关性黄斑变性(amd)、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、进行性家族性肝内胆汁淤积症(pfic)i型(atp8b1缺乏症)、ii型(abcb11)、iii型(abcb4)或iv型(tjp2)和组织蛋白酶a缺乏症。

126、根据一些实施方案，遗传性病患是血友病a。根据一些实施方案，遗传性病患是血友病b。根据一些实施方案，遗传性病患是苯丙酮尿症(pku)。根据一些实施方案，基因病症是威尔逊病。根据一些实施方案，基因病症是戈谢病i、ii或iii型。根据一些实施方案，基因病症是stargardt黄斑营养不良。根据一些实施方案，基因病症是lca10。根据一些实施方案，基因病症是usher综合征。根据一些实施方案，基因病症是湿性amd。

127、根据另一个方面，本公开提供了向受试者的视网膜递送治疗性核酸(tna)或增加tna的浓度的方法，该方法包括向受试者施用有效量的本文的方面或实施方案中的任一项的药物组合物或脂质纳米颗粒组合物。

128、根据另一个方面，本公开提供了向受试者的肝递送治疗性核酸(tna)或增加tna的浓度的方法，该方法包括向受试者施用有效量的本文的方面或实施方案中的任一项的药物组合物或脂质纳米颗粒组合物。