用于递送抗真菌核酸的囊泡制剂

背景技术：

1、真菌病原体对全球粮食安全构成威胁，并且可导致高达20％的作物产量损失以及高达10％的额外收获后产品损失。当前，已经鉴定了对农业上使用的各种主要杀菌剂都有抗药性的真菌菌株。为了继续维护全球粮食安全，必须制定对抗真菌病原体的新策略。最近的进展包括喷雾诱导基因沉默(sigs)，其中抗真菌rna通过喷雾应用适用于植物材料。sigs技术利用rnai技术，可实现物种特异性并同时靶向多个基因的抗真菌rna的多功能设计。sigs已成功用于控制多种真菌病原体、昆虫和病毒。sigs方法的主要缺点是rna在环境中的不稳定性，rna可以被rna酶迅速分解或当暴露于降雨、高湿度和紫外线时迅速分解。此外，许多真菌病原体是土传的，并且dsrna在土壤中迅速分解。

技术实现思路

1、本文提供了包含抗真菌rna和脂质囊泡的组合物。在一些实施方式中，抗真菌rna包含双链rna、小rna或小rna双链体。在一些实施方式中，脂质囊泡是包含叔胺阳离子脂质的人工囊泡。在一些实施方式中，脂质囊泡是天然植物来源的囊泡。囊泡可以是例如胶束、小单层囊泡、大单层囊泡或多层囊泡。阳离子脂质可以是胺，例如n-(1-(2,3-二油酰氧基)丙基)-n,n,n-三甲基氯化铵(dotap)，n,n-二甲基-2,3-二油酰氧基)丙胺(dodma)等。在一些实施方式中，囊泡还包含甾醇。在一些实施方式中，抗真菌rna靶向真菌病原体(例如葡萄孢属(botrytis)或轮枝菌属(verticillium))的dicer样(dcl)基因。在一些实施方式中，抗真菌rna靶向基因，例如涉及病原体运输/分泌途径的基因(例如，此类病原体的液泡蛋白分选51(vps51)、动力蛋白(dctn1)和肌动蛋白抑制蛋白(sac1)。在一些实施方式中，抗真菌rna靶向此类病原体的长末端重复(ltr)区。

2、本文还提供了用于增加植物中病原体抗性的方法。该方法包括使植物与根据本公开的抗真菌rna组合物接触。例如，可以将含有抗真菌rna的囊泡喷洒到农作物或观赏植物上，以?；な栈袂暗呐┳魑锖褪栈窈蟮牟?，包括但不限于水果、蔬菜和花卉。

技术特征：

1.一种包含抗真菌rna和脂质囊泡的组合物，其中所述抗真菌rna包含双链rna、小rna或小rna双链体，并且其中所述脂质囊泡是包含叔胺阳离子脂质的人工囊泡或植物来源的囊泡。

2.如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗真菌rna靶向真菌病原体的dicer样(dcl)基因。

3.如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗真菌rna靶向真菌病原体的液泡蛋白分选51(vps51)基因、动力蛋白(dctn1)基因或肌动蛋白抑制(sac1)基因或其组合。

4.如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗真菌rna靶向真菌病原体的多聚半乳糖醛酸酶基因或外切多聚半乳糖醛酸酶基因或其组合。

5.如权利要求1所述的组合物，其中，所述抗真菌rna靶向真菌病原体的长末端重复(ltr)区或其组合。

6.如权利要求2所述的组合物，其中，所述病原体是葡萄孢属(botrytis)、核盘菌属(sclerotinia)或轮枝菌属(verticillium)。

7.如权利要求1所述的组合物，其中，所述脂质囊泡是植物来源的囊泡。

8.如权利要求7所述的组合物，其中，所述抗真菌rna不由植物来源的囊泡源自的植物表达。

9.如权利要求7或权利要求8所述的组合物，其中，所述植物来源的囊泡获自本氏烟草(n.benthamiana)叶、水果、蔬菜或其组合。

10.如权利要求1所述的组合物，其中，所述脂质囊泡是包含叔胺阳离子脂质的人工囊泡。

11.如权利要求10所述的组合物，其中，所述阳离子脂质是n,n-二甲基-2,3-二油酰氧基)丙胺(dodma)或其盐。

12.如权利要求10或权利要求11所述的组合物，其中，所述阳离子脂质中的仲胺与所述rna中的磷酸盐的比例在约1:1至约10:1的范围内。

13.如权利要求13所述的组合物，其中，所述阳离子脂质中的仲胺与所述rna中的磷酸盐的比例为约4:1。

14.如权利要求10所述的组合物，其中，所述囊泡还包含甾醇。

15.如权利要求14所述的组合物，其含有摩尔比为约1:1至约10:1的阳离子脂质和胆固醇。

16.如权利要求10所述的组合物，其中，所述囊泡是胶束、小单层囊泡、大单层囊泡或多层囊泡。

17.一种增加植物或植物的部分病原体抗性的方法，所述方法包括使所述植物或植物的部分与根据权利要求1所述的组合物接触。

18.如权利要求17所述的方法，其中，将双链rna、小rna或小rna双链体喷雾到植物或植物的部分上。

19.如权利要求17或权利要求18所述的方法，其中，所述植物是产水果或蔬菜的植物。

20.如权利要求17所述的方法，其中，所述植物的部分是水果、蔬菜或花。

技术总结
提供了包含抗真菌RNA和脂质囊泡的组合物，其中抗真菌RNA包含双链RNA、小RNA或小RNA双链体。脂质囊泡可以是例如植物来源的囊泡或含有叔胺阳离子脂质的人工囊泡。例如，RNA可以靶向dicer样(DCL)基因或真菌病原体(例如葡萄孢属或轮枝菌属)的长末端重复(LTR)区域?；姑枋隽嗽銮恐参锊≡蹇剐缘姆椒?。

技术研发人员：金海翎
受?；さ募际跏褂谜撸?/b>加利福尼亚大学董事会
技术研发日：
技术公布日：2024/4/24