异补骨脂查耳酮在制备抗缺氧药物、食品或保健品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设计异补骨脂查耳酮在制备抗缺氧药物、食品或保健品中的应用。
【背景技术】
[0002] 异补骨脂查耳酮（IBC)是一种黄酮类物质，具有C6-C3-C6的基本骨架。IBC于 1968年首次从补骨脂（Psoraleacorylifolia)中被分离提取出来【V.Kuete，L.P.Sandjo. Isobavachalcone：anoverview.Chinesejournalofintegrativemedicine,2012(18)： 543-547.】。IBC抗菌、抗癌、抗逆转录酶以及抗氧化活性。普遍认为，抗氧化与抗缺氧存 在某种关系【E.Szliszka，D.Jaworska，M.Ksek，Z.P.Czuba，W.Krol.TargetingDeath ReceptorTRAIL-R2byChalconesforTRAIL-InducedApoptosisinCancerCells. Internationaljournalofmolecularsciences. 2012(13) :15343-15359.】。本课题组 一直致力于探讨缺氧预适应可能的发生机制，因此IBC的抗氧化活性引起本课题组的关 注。Xiao等采用电子自旋共振的方法测得IBC是一种抗氧化物质。IBC浓度在17iimol/ L时可以抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮（NO)【H.Jing，X.Zhou，X.Dong，J.Cao， H.Zhu,J.Lou,YHu,Q.He,B.Yang.AbrogationofAktsignalingbyIsobavachalcone contributestoitsanti-proliferativeeffectstowardshumancancercells. Cancerletters. 2010(294) :167-177.】。IBC在大鼠肝微粒体和线粒体上表现出广泛的抗 氧化活性，包括抑制NADPH、抗坏血酸、叔丁基氢过氧化物（t-BuOOH)以及四氯化碳（CCl4) 诱导的肝微粒体脂质过氧化，也可以抑制NADH依赖性和抗坏血酸盐诱导的线粒体脂质 过氧化?！京?Ohno，T.Watabe，K.Nakamura，M.Kawagoshi，N.Uotsu，T.Chiba，M.Yamada， K.Yamaguchi,K.Yamada,K.Miyamoto,D.Uemura.Inhibitoryeffectsofbakuchiol, bavachin,andisobavachalconeisolatedfromPiperlongumonmelaninproduction inB16mousemelanomacells.Bioscience,biotechnology,andbiochemistry. 2010(74)： 1504-1506.】。分化的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化的细胞株（PC12细胞）经常被体外缺 氧研究。因此本发明使用分化的PC12细胞进行相关实验。
【发明内容】
[0003] 本
【发明内容】
的目的是提供异补骨脂查耳酮的新通途。
[0004] 本发明所提供的异补骨脂查耳酮的新用途是其在制备抗缺氧药物和/或食品和/ 或保健品中的应用。
[0005] 本发明采用CCK-8法，通过测定分化的PC12细胞的存活率，对异补骨脂查耳酮进 行了细胞毒性检测实验和抗缺氧活性评价实验。
[0006] 本发明实验证明，异补骨脂查耳酮对分化的PC12细胞具有缺氧?；ぷ饔?，因此可 用于制备抗缺氧药物或食品。
[0007] 具体实施方法
[0008] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0009] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0010] 下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。
[0011] 实施例1、异补骨脂查耳酮对分化PC12细胞的细胞毒性作用。
[0012] 1 ?材料和方法
[0013] 1.1试剂配制
[0014] 标准品异补骨脂查耳酮由南京泽郎公司提供。精密称取异补骨脂查耳酮0. 01296g 置于ImL容量瓶中，用DMSO充分溶解配制成40mM的母液，再将母液用1640分化培养基（1% 胎牛血清，50ng/100mLNGF，1 %青霉素链霉素混合液，1 % 2mM谷氨酰胺溶液）稀释成所需 检测的给药浓度，所需检测的给药浓度为50iiM，10iiM，2iiM，0. 4iiM。
[0015] I. 2 方法
[0016] 取处于对数生长期的PC12细胞进行实验。按照细胞密度5XIO3个每孔接种于96 孔板中（已用PLL包被），用分化1640培养基进行分化培养。分化48h后，进行给药实验。 每个给药浓度设置6个复孔，同时设置空白对照孔（只加入分化1640培养液），置于培养 箱中在37°C、5%CO2条件下全湿培养。48h后小心弃去培养基，每孔加入IOOiiL含有10% CCK-8的1640分化培养液，放置于培养箱中继续培养。2h后用酶联免疫检测仪在450nm下 检测吸光度OD值。
[0017] 2数据统计学处理
[0018] 所有数据用mean土S.D.表示，统计学分析采用SPSS16. 0分析软件。所有数据通 过正态性检验后符合正态性，分别将不同浓度给药组与空白对照组进行独立样本t检验，p < 0. 05表示差异具有统计学意义。
[0019] 3实验结果
[0020] 异补骨脂查耳酮浓度为50iimol/L和10iimol/L时，会使分化PC12细胞的存活率 下降，在浓度为2iiM和0. 4iimol/L时，对分化PC12细胞的存活率无影响。结果见表1。
[0021] 表1异补骨脂查耳酮在不同浓度下对分化PC12细胞的毒性作用
[0022]
[0023] *经过独立样本t检验后，实验组与对照组相比，p< 0.05,差异具有统计学意义。
[0024] 4 结论
[0025] 结果表明，异补骨脂查耳酮浓度为2iiM及2iiM以下时对分化PC12细胞的存活率 无影响，
[0026] 因此可以选择2iiM及2iiM以下的浓度作为缺氧?；な笛榕ǘ?。
[0027] 实施例2.异补骨脂查耳酮的抗缺氧实验
[0028] 1材料和方法
[0029] I. 1试剂配制
[0030] 标准品异补骨脂查耳酮由南京泽郎公司提供。精密称取异补骨脂查耳酮0. 〇1296g 置于ImL容量瓶中，用DMSO充分溶解配制成40mM的母液，再将母液用1640分化培养基稀 释成所需检测的给药浓度，所需检测的给药浓度为2yM，0. 4yM。
[0031] 1.2 方法
[0032] 取处于对数生长期的PC12细胞进行实验。按照细胞密度5XIO3个每孔接种于96 孔板中（已用PLL包被），用分化1640培养基进行分化培养。分化48h后，进行给药和缺 氧实验。每个给药浓度设置6个复孔，同时设置空白对照孔（只加入分化1640培养液）， 缺氧条件为37°C、5%CO2U%O2并向培养基中加入2mM的连二亚硫酸钠，制造化学缺氧和 物理缺氧相结合的缺氧环境。48h后小心弃去培养基，每孔加入IOOiiL含有10%CCK-8的 1640分化培养液，放置于培养箱中继续培养。2h后用酶联免疫检测仪在450nm下检测吸光 度OD值。
[0033] 2数据统计学处理
[0034] 所有数据用mean+S.D.表示，统计学分析采用SPSS16. 0分析软件。所有数据通过 正态性检验后符合正态性，分别将不同浓度给药组与缺氧组进行独立样本t检验，p< 0. 05 表示差异具有统计学意义。
[0035] 3实验结果
[0036] 异补骨脂查耳酮浓度为2iiM和0. 4iiM时，可以提高分化PC12细胞在缺氧条件下 的细胞存活率，具有缺氧?；ぷ饔?。结果见表2。
[0037] 表2异补骨脂查耳酮在不同浓度下对分化PC12细胞的缺氧?；ぷ饔?br>[0038]
[0039] *经过独立样本t检验后，实验组与对照组相比，p< 0.05,差异具有统计学意义。
[0040] 2. 4实验结论
[0041 ] 异补骨脂查耳酮在2iiM和0. 4iiM时，可以提高分化PC12细胞在缺氧条件下的细 胞存活率，对分化PC12细胞有缺氧?；ぷ饔?。其中2iiM异补骨脂查耳酮可以使分化PC12 细胞的存活率达到与对照组的细胞存活率相似的水平。因此异补骨脂查耳酮在实验浓度范 围内对分化PC12细胞具有缺氧?；ぷ饔?，可用于制备抗缺氧药物、食品或保健品。
【主权项】
1. 异补骨脂查耳酮在制备抗缺氧药物中的应用。2. 异补骨脂查耳酮在制备抗缺氧保健品中的应用。3. 异补骨脂查耳酮在制备抗缺氧食品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了黄酮类天然活性物质异补骨脂查耳酮在制备抗缺氧药物、食品或保健品中的应用。本发明通过细胞水平缺氧模型，观察了异补骨脂查耳酮的抗缺氧作用。结果表明异补骨脂查耳酮在2μM和0.4μM时，可以提高体外培养的神经细胞在缺氧条件下的存活率，对体外培养的神经细胞具有?；ぷ饔?，提供了异补骨脂查耳酮在制备抗缺氧药物、食品或保健品中的用途。
【IPC分类】A23L1/29, A61K31/12, A61P39/00
【公开号】CN105078940
【申请号】CN201410187406
【发明人】薛明, 苏甦, 徐平湘, 白露
【申请人】首都医科大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月5日