CD70的抗体及其应用

本公开涉及生物医药领域，具体地，本公开涉及一种抗cd70的抗体及其应用。

背景技术：

1、cd70(cd27配体)是一种细胞表面蛋白，属于肿瘤坏死因子超家族(tnfsuperfamily),是一种ii型跨膜糖蛋白，由193个氨基酸组成，分子量为50kda?；谄渌鹴nf超家族的同源序列预测显示，cd70以同源三聚体的形式与三个cd27同源二聚体相结合。cd70与cd27相结合，从而激活下游的nfκb和c-jun激酶途径，进一步促进细胞的增殖、存活与分化。

2、cd70在多种恶性疾病中，包括急性髓系白血病(aml)、恶性淋巴瘤和某些实体肿瘤中高表达，且其过度表达在肿瘤细胞中可能发挥促进肿瘤生长和免疫逃逸的作用。而在正常组织中，cd70仅在活化的免疫细胞上限制性表达，且表达水平较低，这使得cd70成为免疫治疗的一个理想靶点。除此以外，研究表明cd70-cd27信号通路在免疫逃逸中发挥重要作用。肿瘤细胞通过高表达cd70持续作用于t细胞表面的cd27，促进抑制性调节t细胞的增殖，增加t细胞的凋亡与耗竭，从而发挥免疫抑制作用，在免疫逃逸中发挥作用。而研究发现cd70抗体的应用可以通过阻断cd70-cd27信号通路消除肿瘤微环境中的免疫抑制作用。

3、综上，靶向cd70的治疗可以通过特异性杀伤表达cd70的肿瘤细胞群，及阻断cd70-cd27信号轴消除促肿瘤作用来发挥作用。目前已有多种靶向cd70的疗法在临床前及临床研究中取得进展，如：抗体药物偶联物(adc)mdx-1203、amg?172、sgn-75和sgn-cd70a均已完成i期临床，sea-cd70目前正在骨髓恶性肿瘤的治疗中进行临床试验研究；argx-110等药物通过携带fc受体(fcγriii)基于抗体依赖性细胞毒性(adcc)作用激活免疫效应细胞并阻断靶蛋白，已证明可以有效消除接受低甲基化药物治疗的aml患者的白血病干细胞(lsc)；靶向cd70的car-t细胞疗法包括anti-hcd70?car(nct02830724),4scar70(nct03125577),carcd70(nct04662294),ctx130(nct04438083)及allo316(nct04696731)正在血液肿瘤和实体恶性肿瘤患者中进行i/ii期临床试验的评估。

4、尽管cd70抗体疗法在血液恶性肿瘤和实体瘤的治疗中展现出巨大的潜力，但因安全性和疗效有限等诸多问题，目前仍没有靶向cd70的疗法被正式应用于临床。因此我们需要进一步探索和开发靶向cd70的抗体，为其临床研究及应用提供新的可能。

技术实现思路

1、解决的技术问题：

2、本公开的一个方面，是针对现有技术中缺少效果理想的靶向cd70的抗体的缺陷，提供了一种分离的抗体。

3、技术方案：

4、一种分离的抗体，所述抗体特异性结合人cd70蛋白，所述抗体包括：

5、如seq?id?no.1、9、17或25所示的重链可变区的cdrh1的氨基酸序列；

6、如seq?id?no.2、10、18或26所示的重链可变区的cdrh2的氨基酸序列；

7、如seq?id?no.3、11、19或27所示的重链可变区的cdrh3的氨基酸序列；

8、如seq?id?no.4、12、20或28所示的轻链可变区的cdrl1的氨基酸序列；

9、如seq?id?no.5、13、21或29所示的轻链可变区的cdrl2的氨基酸序列；和

10、如seq?id?no.6、14、22或30所示的轻链可变区的cdrl3的氨基酸序列。

11、在本公开的某些实施方式中，所述抗体包括：

12、如seq?id?no.7、15、23或31所示的重链可变区的氨基酸序列；和

13、如seq?id?no.8、16、24或32所示的轻链可变区的氨基酸序列。

14、在本公开的某些实施方式中，所述抗体可以是哺乳动物来源的抗体，例如，鼠、兔、羊、马、猴、猪、骆驼、鲨鱼、鸡，等。在本公开的另一些实施方式中，所述抗体可以是嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。

15、在本公开的某些实施方式中，所述抗体可以为igg、iga、igm、igd或ige。作为优选，在本公开的某些实施方式中，所述抗体的类型可以为igg。进一步地，在本公开的某些实施方式中，所述抗体可以为选自igg1、igg2、igg3或igg4中的一种或几种。优选地，所述抗体可以为igg1。

16、在本公开的某些实施方式中，所述抗体为单克隆抗体。

17、在本公开的某些实施方式中，所述抗体包括fc部分。作为优选，在本公开的某些实施方式中，所述抗体的fc部分经过修饰或改造以增强其adcc活性、cdc活性或adcp活性。

18、本公开的另一个方面，是提供了一种分离的抗原结合部分，所述抗原结合部分特异性结合人cd70蛋白，所述抗原结合部分包括选自以下氨基酸序列中的一种或几种：如seqid?no.1、7、13或19所示的重链可变区的cdrh1的氨基酸序列；

19、如seq?id?no.1、9、17或25所示的重链可变区的cdrh1的氨基酸序列；

20、如seq?id?no.2、10、18或26所示的重链可变区的cdrh2的氨基酸序列；

21、如seq?id?no.3、11、19或27所示的重链可变区的cdrh3的氨基酸序列；

22、如seq?id?no.4、12、20或28所示的轻链可变区的cdrl1的氨基酸序列；

23、如seq?id?no.5、13、21或29所示的轻链可变区的cdrl2的氨基酸序列；或

24、如seq?id?no.6、14、22或30所示的轻链可变区的cdrl3的氨基酸序列。

25、在本公开的某些实施方式中，所述抗原结合部分包括：

26、如seq?id?no.7、15、23或31所示的重链可变区的氨基酸序列；和/或

27、如seq?id?no.8、16、24或32所示的轻链可变区的氨基酸序列。

28、在本公开的某些实施方式中，所述抗原结合部分可以为fab、fab'、f(ab')2、fd、fcl、dab、单链抗体scfv、嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。

29、本公开的另一个方面，是提供了一种多价抗体，所述多价抗体的单体为上述抗体或上述抗原结合部分。所述多价抗体可以为，例如，二价、三价、四价、六价、九价，等?？梢岳孟钟屑际踔泻鲜实姆椒ㄖ票杆龆嗉劭固?。

30、本公开的另一个方面，是提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码上述抗体、上述抗原结合部分或上述多价抗体。在本公开的某些实施方式中，所述多核苷酸还编码选自如seq?id?no.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31或32所示的氨基酸序列中的一种或几种，其中，所述氨基酸序列或其组合构成上述抗体，上述抗原结合部分，或上述多价抗体。

31、本公开的另一个方面，是提供了一种载体，所述载体包括上述多核苷酸。

32、本公开的另一个方面，是提供了一种细胞，所述细胞包含上述抗体，上述抗原结合部分，上述多价抗体，或上述多核苷酸。在本公开中，所述细胞可以为任意合适的作为生产目标蛋白质工具的宿主细胞。例如，sp2/0、yb2/0、ir983f、人骨髓瘤namalwa、perc6或cho细胞系、昆虫细胞、大肠杆菌细胞。

33、本公开的另一个方面，是提供了一种产生抗cd70抗体或抗原结合部分的方法，将上述细胞进行蛋白质表达后，直接或间接地获得所述抗cd70抗体或抗原结合部分。

34、本公开的另一个方面，是提供了一种多特异性抗体，所述多特异性抗体至少选择性结合人cd70，所述多特异性抗体包含上述抗体或上述抗原结合部分；所述多特异性抗体为单价抗体或多价抗体。所述多特异性抗体可以为，例如，双特异性、三特异性。所述多价抗体可以为，例如，二价、三价、四价、六价、九价，等?？梢岳孟钟屑际踔泻鲜实姆椒ㄖ票杆龆嗉劭固?。

35、本公开的另一个方面，是提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含上述抗体，上述抗原结合部分，上述多价抗体，上述多核苷酸，上述细胞，或上述多特异性抗体，以及药学上可接受的载体。为了实现更好的治疗效果，在本公开的某些实施方式中，所述药物组合物中还可以包含其他治疗性药物。

36、本公开的另一个方面，是提供了一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包括：a)上述抗体，上述抗原结合部分，上述多价抗体或上述多特异性抗体；和b)治疗剂或可检测标记物；和c)上述a)与b)两部分的连接体；其中，所述治疗剂包括药物、酶、毒素、细胞因子或放射性核素。

37、本公开的另一个方面，是提供了上述抗体，上述抗原结合部分，上述多价抗体，上述多核苷酸，上述细胞，上述多特异性抗体，上述药物组合物，或上述免疫缀合物在制备治疗血液肿瘤的药物中的用途。作为优选，在本公开的某些实施方式中，所述血液肿瘤为浆细胞瘤。更优选地，在本公开的某些实施方式中，所述血液肿瘤为多发性骨髓瘤。

38、本公开的另一个方面，是提供了上述抗体，上述抗原结合部分，上述多价抗体，或上述多特异性抗体在制备检测样本中cd70的存在或者水平的产品中的用途。

39、有益效果：

40、本公开提供的抗人cd70抗体与cd70蛋白具有高亲和性，且结合特异性强，与阴性细胞3t3、kasumi-1、jurkat、k562、kg1a和nalm6无交叉反应?；谡庑┨匦愿每固寮瓤捎糜诩觳獗泶颿d70的细胞，也能够单独或与其它方法联合应用在肿瘤免疫治疗中，即能够有效运用于制备治疗肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病以及抗免疫排斥等的药物。